多糖的分離提純涉及兩個方面。
多糖從其它物質中的分離
將多糖同低分子有機物、無機鹽等成分分離,或是同蛋白質、酯類、木質素等其它高分子量的自然產物分離。這樣提取的多糖通常具有多分散性,表現在化學組成、聚合度、分子形狀等分布不均一。因此,還要將這種多分散的多糖混合物分離純化成分布均一的單個多糖組分。這種分離具有相當大的困難,但意義重大。因為初步研究表明,某種多糖的藥效活性與其組成、分子結構及分子量水平都密切相關。免疫應答對單糖的化學結構是非特異性的,它主要由分子大小決定而不是單糖的化學結構。由于不同的植物中所含成分不同,從其中提取多糖成分的具體方法有很大差異,但通常都包括水提、醇沉、除脂、除蛋白、脫色、柱分離這些基本步驟。具體的提取工藝則根據子實體的種類及多糖的存在部位有所不同。
單一多糖的分離提純
按分子大小和形狀進行分級(如分級沉淀,分子篩,層析等),也可按分子所帶基因的性質進行分級(如按電荷性質分級的電泳,離子交換層析等)。將其大致歸納如下:
分級沉淀:利用多糖分子的體積大小和溶解度不同而分離,常用的有有機溶劑沉淀法,季銨鹽、硫酸鹽法,金屬絡合物法等。
柱層析法:
a.只有分子篩作用的凝膠柱層析,如Sephadex、Saphrose、Biogel等。
b.離子交換層析,這種分級不僅按電荷性質不同,同時也有分子篩的作用,如帶負電荷的多糖可在陰離子型DEAE-纖維素柱或DEAE-Sephadex柱上達到分級,酸性多糖可在陽離子性的羧甲基或黃乙基等凝膠柱上分離。這種離子交換樹脂常用水或不同濃度和種類的緩沖溶液或酸堿液洗脫得以分級。
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